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        小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實驗提醒

        更新時間:2024-03-21    點擊次數:1703

          小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實驗提醒

         

          小鼠ELISA試劑盒操作步驟:

          1. 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

          2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

          3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。

          4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

          5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

          6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

          7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

          8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

          9. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

          實驗提醒:

          1、混合蛋白溶液時,避免起泡。

          2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。

          3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。

          4、底物溶液為無色液體,保存過程中變為藍色,代表底物溶液已經失效,不得使用。

          5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變為黃色。

          6、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

          7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

          8、檢測必須符合實驗室管理規范的規定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

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